Biotechnologies

ELECTROPHORESE CAPILLAIRE EN PRATIQUE POUR LES MOLECULES BIOLOGIQUES DANS LE DOMAINE PHARMACEUTIQUE

Durée 3 jours 20 heures
Sessions
  • 17 - 19 novembre 2020
Lieu Villeurbanne

Frais d’inscription
(déjeuner inclus)

1 755 € HT

Public concerné

Ingénieurs
Pharmaciens
Techniciens supérieurs

Objectifs

Présenter les principes, l'instrumentation et les applications de l'électrophorèse capillaire à la caractérisation d’acides aminés, protéines et anticorps, oligonucléotides

Contenu pédagogique

THEORIE

Généralités sur les techniques électrocinétiques 

  • De l’électrophorèse capillaire de zone à la chromatographie électrocinétique.
  • Les Phénomènes de transport : migration électrophorétique et écoulement électroosmotique Aspects instrumentaux
  • Modes de détection (UV-Vis, Fluorescence induite par laser LIF, conductimétrie, spectrométrie de masse)
  • Analyse quantitative : les modes d’injection, de préconcentration et de quantification

Les modes de séparations électrocinétiques pour l’analyse des molécules biologiques

  • Electrophorèse capillaire de zone en milieu libre
  • Séparation des acides aminés et peptides
  • Spécificités liées à l’analyse des protéines
  • Caractérisation de la glycosylation des anticorps : séparation par électrophorèse capillaire couplée à la détection par fluorescence induite par laser LIF après clivage et dérivation
  • Exemples de séparation

Chromatographie électrocinétique capillaire 

 

Séparation de peptides ou d’acides aminés dérivés en chromatographie électrocinétique micellaire, séparations chirales en présence de pseudo-phases stationnaires chirales

Electrophorèse capillaire sur gel

 

Séparation des protéines, anticorps et des oligonucléotides en fonction de leur taille, détermination des masses moléculaires, de la pureté

Focalisation isoélectrique 

TRAVAUX PRATIQUES AU LABORATOIRE

Electrophorèse capillaire de zone

  • Influence des principaux paramètres expérimentaux: pH de l’électrolyte, force ionique de l’électrolyte, température, tension appliquée. Mesure des temps de migration et des efficacités de séparation – Calculs des mobilités électroosmotique – Ordre de migration

Séparation sur gel 

 

  • Caractérisation des anticorps monoclonaux et de leurs fragments en fonction de leur taille (électrophorèse sur gel en milieu dénaturant avec détection UV)- détermination de la masse moléculaire de protéines, d’oligonucléotides

Focalisation isoélectrique capillaire 

 

  • Séparation de protéines en fonction de leur point isoélectrique – influence du gradient de pH

Chromatographie électrocinétique

 

  • Séparations de peptides en chromatographie électrocinétique micellaire. Séparations chirales en présence de pseudo phases stationnaires chirales.

Coordonnées

CPE Lyon Formation Continue

Campus Saint-Paul – Bâtiment F 10, Place des Archives – 69002 LYON

04.72.32.50.60