ELECTROPHORESE CAPILLAIRE EN PRATIQUE POUR LES MOLECULES BIOLOGIQUES DANS LE DOMAINE PHARMACEUTIQUE

THEORIE

• Généralités sur les techniques électrocinétiques 

De l’électrophorèse capillaire de zone à la chromatographie électrocinétique.

Les Phénomènes de transport : migration électrophorétique et écoulement électroosmotique Aspects instrumentaux

Modes de détection (UV-Vis, Fluorescence induite par laser LIF, conductimétrie, spectrométrie de masse)

Analyse quantitative : les modes d’injection, de préconcentration et de quantification

• Les modes de séparations électrocinétiques pour l’analyse des molécules biologiques

Electrophorèse capillaire de zone en milieu libre

Séparation des acides aminés et peptides

Spécificités liées à l’analyse des protéines

Caractérisation de la glycosylation des anticorps : séparation par électrophorèse capillaire couplée à la détection par fluorescence induite par laser LIF après clivage et dérivation

Exemples de séparation

• Chromatographie électrocinétique capillaire 

Séparation de peptides ou d’acides aminés  dérivés en chromatographie électrocinétique micellaire, séparations chirales en présence de pseudo-phases stationnaires chirales

• Electrophorèse capillaire sur gel

Séparation des protéines, anticorps et des oligonucléotides en fonction de leur taille, détermination des masses moléculaires, de la pureté

• Focalisation isoélectrique 

Séparation des protéines en fonction de leur point isoélectrique

TRAVAUX PRATIQUES AU LABORATOIRE

• Electrophorèse capillaire de zone

Influence des principaux paramètres expérimentaux: pH de l’électrolyte, force ionique de l’électrolyte, température, tension appliquée. Mesure des temps de migration et des efficacités de séparation – Calculs des mobilités électroosmotique – Ordre de migration

• Séparation sur gel 

Caractérisation des anticorps monoclonaux et de leurs fragments en fonction de leur taille (électrophorèse sur gel en milieu dénaturant avec détection UV)- détermination de la masse moléculaire de protéines, d’oligonucléotides

• Focalisation isoélectrique capillaire 

Séparation de protéines en fonction de leur point isoélectrique – influence du gradient de pH

• Chromatographie électrocinétique

Séparations de peptides en chromatographie électrocinétique micellaire. Séparations chirales en présence de pseudo phases stationnaires chirales.