Biotechnologies

ELECTROPHORESE DES PROTEINES EN GEL DE POLYACRYLAMIDE EN PRÉSENCE DE SDS (SDS-PAGE) – ANALYSE DES PROTÉINES PAR « WESTERN BLOT » APRÈS SDS-PAGE

Durée 3.5 jours 24 heures
Sessions
  • 15 - 18 (am) octobre 2018
Lieu Lyon

Frais d’inscription
(déjeuner inclus)

2 085 € HT

Public concerné

Ingénieurs
Techniciens supérieurs

Objectifs

Connaître les principes de base et la mise en œuvre des techniques de séparation des protéines par électrophorèse en gel de polyacrylamide en présence de SDS et de la révélation spécifique de certaines d’entre elles par «Western Blot ».

Contenu pédagogique

THÉORIE

Rappel sur la structure des protéines

Rôle des acides aminés, de la liaison peptidique, de la liaison hydrogène, des interactions hydrophobes, des interactions ioniques, des modifications post-traductionnelles dans la structure primaire, secondaire, tertiaire et quaternaire des protéines

Notions de poids et de masse moléculaire, ainsi que de charge électrique à un pH donné et de pHi

Les conditions de solubilisation des protéines en préalable à leur analyse

Rôle du pH, des détergents ioniques, non ioniques, des zwitterrions ; rôle de l’urée

Principes de la séparation des protéines par électrophorèse

L’électrophorèse des protéines en gel de polyacrylamide en présence de SDS (SDS-PAGE)

Les conditions de l’électrophorèse – Les paramètres électriques

Révélation et identification des protéines

(différentes méthodes de coloration y compris la coloration à l’argent)

Principe du transfert des protéines pour le « western blot » (WB)

Méthodes de transfert des protéines sur membrane après SDS-PAGE

Méthodes de révélation et d’identification des protéines d’intérêt

Questions/réponses à des problèmes concrets

 

TRAVAUX PRATIQUES

Découverte de la méthodologie et des appareils – Démonstration de la procédure
Préparation des tampons, des solutions et des réactifs
Préparation et polymérisation des gels de polyacrylamide
Dépôt des échantillons
Séparation des protéines par SDS-PAGE
Coloration des protéines au bleu de Coomassie
Coloration des protéines à l’argent
Transfert des protéines sur membrane après séparation par électrophorèse
Révélation des protéines séparées par SDS-PAGE et transférées sur membrane (WB)
Questions/réponses à des problèmes concrets

Coordonnées

CPE Lyon Formation Continue

Campus Saint-Paul – Bâtiment F 10, Place des Archives – 69002 LYON

04.72.32.50.60