TECHNIQUES ELECTROPHORETIQUES – APPLICATION A L’ELECTROPHORESE DES PROTEINES ET DES ACIDES NUCLEIQUES

Rappel des propriétés des protéines et des acides nucléiques en relation avec les techniques analytiques

• Structure
• Propriétés physico-chimiques (ionisation, solubilité, dénaturation…)

Techniques électrophorétiques

• Objectifs (étude d’un mélange, vérification de la pureté d’un échantillon, analyse de la structure, détermination de la masse moléculaire, produits de PCR)
• Principes
• Matériels et supports : gel de polyacrylamide, gel d’agarose
• Domaines d’application

Obtention de l’échantillon

• Extraction des fractions protéiques
• Purification d’échantillons protéiques
• Electrophorèse en condition native ou dénaturante (PAGE, SDS PAGE)
• Préparation de l’échantillon
• Dépôt – Migration – Révélation – Exploitation
• Produits PCR et fragments de restriction

Introduction aux techniques de transfert des protéines

• Intérêt de la technique
• Transfert (Western Blot)
• Révélation
• Analyse

Applications pratiques