ELECTROPHORESE DES PROTEINES EN GEL DE POLYACRYLAMIDE EN PRÉSENCE DE SDS (SDS-PAGE) – ANALYSE DES PROTÉINES PAR « WESTERN BLOT » APRÈS SDS-PAGE

THÉORIE

Rappel sur la structure des protéines

Rôle des acides aminés, de la liaison peptidique, de la liaison hydrogène, des interactions hydrophobes, des interactions ioniques, des modifications post-traductionnelles dans la structure primaire, secondaire, tertiaire et quaternaire des protéines

Notions de poids et de masse moléculaire, ainsi que de charge électrique à un pH donné et de pHi

Les conditions de solubilisation des protéines en préalable à leur analyse

Rôle du pH, des détergents ioniques, non ioniques, des zwitterrions ; rôle de l’urée

Principes de la séparation des protéines par électrophorèse

L’électrophorèse des protéines en gel de polyacrylamide en présence de SDS (SDS-PAGE)

Les conditions de l’électrophorèse – Les paramètres électriques

Révélation et identification des protéines

(différentes méthodes de coloration y compris la coloration à l’argent)

Principe du transfert des protéines pour le « western blot » (WB)

Méthodes de transfert des protéines sur membrane après SDS-PAGE

Méthodes de révélation et d’identification des protéines d’intérêt

Questions/réponses à des problèmes concrets

TRAVAUX PRATIQUES

Découverte de la méthodologie et des appareils – Démonstration de la procédure
Préparation des tampons, des solutions et des réactifs
Préparation et polymérisation des gels de polyacrylamide
Dépôt des échantillons
Séparation des protéines par SDS-PAGE
Coloration des protéines au bleu de Coomassie
Coloration des protéines à l’argent
Transfert des protéines sur membrane après séparation par électrophorèse
Révélation des protéines séparées par SDS-PAGE et transférées sur membrane (WB)
Questions/réponses à des problèmes concrets