METHODE qPCR

THEORIE

Bases moléculaires de la PCR

Limites de la PCR en point final et réponse de la PCR en temps réel

Détermination de la phase « quantitative » de la PCR

Gamme d’étalonnage en nombres de copies : une nécessité

PCR en temps réel

Quantification du nombre de copies d’ADN avant amplification

Détection des produits d’amplification

Sensibilité et spécificité

Etapes essentielles dans la mise au point d’une quantification d’ADN par PCR en temps réel

Familles de thermocycleurs

Avantages et inconvénients

Plateforme de RT et qPCR

Principe de « marche en avant » et « Bonnes Pratiques de Laboratoire »

Les recommandations « MIQE »

Minimum Information for publication of Quantitative real-time PCR Experiments

Applications de la PCR en temps réel

A La quantification de transcrits dans les analyses d’expression relative de gènes d’intérêt : RT-qPCR quantitative ou relative ?
Atouts des étalons externes non compétitifs
A l’agro-alimentaire
A la virologie

PCR multiplex

Avantages et inconvénients

TRAVAUX PRATIQUES

Réalisation d’une analyse
Discussions de cas pratiques partagés par les participants